Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 使用超高分子量DNA作为其实材料，并希望稳定产出N50大于50kb的超长读长
- 希望使用端到端的超高分子量 DNA 测序工作流程
本品为一款早期试用产品
如需有关早期试用计划的更多信息，请参阅 本文了解产品的不同发布阶段
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
DNA超长片段测序试剂盒 V14 用于超高分子量（uHMW）DNA的建库测序，并可产出N50>50kb且最长读长达4MB以上的超长序列片段。试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将转座酶接头连接至酶切端。再将快速测序文库接头与转座酶接头连接。最后将DNA文库洗脱过夜。
该试剂盒采用最新的试剂盒 14系列试剂，当与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，原始序列准确率众数进一步提高且产出量增大。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
试剂盒14系列亦沿用了之前产品的优势，例如：接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
DNA超长片段测序试剂盒 V14中现包含提取洗脱缓冲液 (EEB) 和沉淀缓冲液 (PTB)，及经过升级、现与试剂盒 14系列兼容的冲洗系绳 UL（FTU） 。试剂盒还提供促进DNA沉淀和回收的‘沉淀星’（PS）。
我们使用 NEB Monarch® 高分子量组织DNA提取试剂盒提取超高分子量基因组DNA，将从DNA提取到测序的端到端工作流程缩减至一日。
下述起始材料已经过验证，可参照本实验指南进行端到端测序，并产出高N50的序列片段：
- 六百万个体外培养的人类细胞（如GM24385）
- 从血液中分离出的六百万个外周血单核细胞（PBMCs）
在MinION及PromethION上为上述起始材料测序并配合使用测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）时，将获得高数据产出。
DNA超长片段测序试剂盒 V14 特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | ~200 分钟 + 洗脱过夜 |
| 起始材料要求 | - 外周血单核细胞：六百万个
- 分离自冷冻组织的细胞：六百万个 |
| 是否需要PCR | 不需要 |
| 片段化 | 基于转座酶 |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒14系列试剂（V14） |
| 读长 | 50–100+ kb N50，读长最长 4+ Mb |
| 相关实验指南 | DNA超长片段测序试剂盒 (SQK-ULK114) |
| 包装大小 | 测序试剂盒中试剂可满足六次文库制备和测序实验。每次制备的文库量可满足在单张MinION或PromethION上连续上样三次。 |
| 稳定性 | 运输温度 2–8℃
长期存储温度 -20℃
Oxford Nanopore Technologies规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
运输和物流
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
本实验指南使用NEB Monarch® 高分子量组织DNA提取试剂盒(Monarch® HMW DNA Extraction Kit)从体外培养细胞、经纯化细胞或全血中提取基因组DNA，并使用DNA超长片段测序试剂盒 V14 对超高分子量DNA进行测序。整套工作流程仅需一日。
试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将转座酶接头连接至酶切端。然后将连有 转座酶接头的序列片段与快速文库接头相连。再洗脱过夜，上样至芯片测序。
Protocols
DNA超长片段测序试剂盒 V14 (SQK-ULK114)
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What's in the box
DNA超长片段测序试剂盒 V14 内含六次文库制备的试剂用量。每个文库可供MinION、GridION或PromethION芯片上样三次。
请注意： 我们优化了沉淀星（PS）的生产工艺和内部验证流程，并调整了试剂盒内试剂的布局以体现新批次的改进。
包含改进后可用沉淀星的新试剂盒排布：
ULK114.30.0001 或更新批次
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 快速测序文库接头 | RA | 绿色 | 1 | 40 |
| 片段化反应试剂 | FRA | 琥珀色 | 1 | 50 |
| FRA稀释缓冲液 | FDB | 透明 | 1 | 1,600 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 2 | 1,500 |
| 提取洗脱缓冲液 | EEB | 橙色 | 3 | 1,700 |
| 测序缓冲液 UL | SBU | 红色 | 2 | 1,000 |
| 上样溶液 UL | LSU | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 200 |
| 冲洗系绳 UL | FTU | 紫色 | 1 | 600 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 2 | 15,500 |
| 沉淀缓冲液 | PTB | 蓝色 | 2 | 1,700 |
| 沉淀星 | PS | 黄色 | 6 | 1 颗 |
之前批次试剂盒排布，不应使用沉淀星：
ULK114.20.xxxx 或更早批次
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 快速测序文库接头 | RA | 绿色 | 1 | 40 |
| 片段化反应试剂 | FRA | 琥珀色 | 1 | 50 |
| FRA稀释缓冲液 | FDB | 透明 | 1 | 1,600 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 2 | 1,500 |
| 提取洗脱缓冲液 | EEB | 橙色 | 3 | 1,700 |
| 测序缓冲液 UL | SBU | 红色 | 2 | 1,000 |
| 上样溶液 UL | LSU | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 200 |
| 冲洗系绳 UL | FTU | 紫色 | 1 | 600 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 2 | 15,500 |
| 沉淀缓冲液 | PTB | 蓝色 | 2 | 1,700 |
| 沉淀星 | PS | 黄色 | 6 | 1 颗 |
Compatibility
DNA超长片段测序试剂盒 V14(SQK-ULK114) 可与以下产品联用：
试剂盒
- 测序芯片清洗试剂盒 (EXP-WSH004)
- 提取洗脱缓冲液扩展包 (EXP-EEB001)
- 超长片段辅助扩展包 (EXP-ULA001)
测序芯片
R10.4.1:
测序设备
- MinION Mk1B
- MinION Mk1C
- GridION
- PromethION
