Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望混样测序以降低单个样本的测序成本
- 仅拥有少量起始gDNA
- 需要一套简便的文库制备流程
本品为一款早期试用产品。
如需有关早期试用计划的更多信息，请参阅 本文了解产品的不同发布阶段
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
当单张测序芯片能产出的总数据量高于单个样本所需数据量时，将多个样本混样测序再进行条码拆分，可提高芯片的利用效率，并节省用户对单个样本的测序支出。
快速PCR条形码测序试剂盒-24 V14的特点：
快速PCR条形码试剂盒-24 V14 为低起始量gDNA（1-5 ng）的文库构建提供了最快速简便的方法，手动制备时间仅需约 15 分钟。
该试剂盒采用最新的试剂盒 14系列试剂，当与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，测序产出量高且原始序列准确率众数不低于99% (Q20+)。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
其它更新包括：接头的gDNA捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将含有引物结合位点的标签连接至酶切端。试剂盒内含24种引物，用于扩增各样本并为其添加条形码及5’标签。该标签可促成含条码样本与快速测序文库接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
MinKNOW软件、独立的Guppy碱基识别工具和EPI2ME均支持混样测序数据的条码拆分，并根据条码将序列片段分类分配至相应文件夹。
更多信息：
当样本量不足时，可以采用PCR扩增的方式增加起始核酸量。而当样本纯度较低时，建库效率也会受到影响，此时可选择PCR特异性扩增成功连接PCR接头的分子，从而稀释或去除文库中的杂质。在大多数情况下，PCR扩增可大大提升由文库引起的低测序表现。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
快速PCR条形码试剂盒-24 V14 为低起始量gDNA（1-5 ng）的文库构建提供了最快速简便的方法，手动制备时间仅需约 15 分钟。
试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将含有引物结合位点的标签连接至酶切端。试剂盒内含24种引物，用于扩增各样本并为其添加条形码及5’标签。该标签可促成含条码样本与快速测序文库接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
What's in the box
快速PCR条形码测序试剂盒-24 V14可用于六次反应。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 快速条形码引物 | RLB01-24 | 24（每管含一种条形码） | 透明 | 15 |
| 片段化反应试剂 | FRM | 1 | 琥珀色 | 160 |
| 快速测序文库接头 | RAP | 1 | Green | 15 |
| 接头缓冲液 | ADB | 1 | 透明 | 100 |
| AMPure XP 磁珠 | AXP | 3 | 琥珀色 | 1,200 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 2 | 黑色 | 500 |
| EDTA | EDTA | 1 | 蓝色 | 700 |
| 测序缓冲液 | SB | 1 | 红色 | 700 |
| 文库颗粒 | LIB | 1 | 粉色 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 1 | 白色管盖，粉色标签 | 600 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 1 | 白色 | 8,000 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 1 | 紫色 | 200 |
3rd party materials
耗材
- LongAmp 热启动 Taq 2X 预混液 (NEB, M0533)
- (非必需）牛血清白蛋白 (BSA) (50 mg/mL) （例如Invitrogen™ UltraPure™ BSA (50 mg/mL) 目录号 AM2616）
- 1.5ml Eppendorf DNA LoBind离心管
- 0.2 ml薄壁PCR管
- 无核酸酶水（如ThermoFisher，目录号AM9937）
- 新制备的80％乙醇（用无核酸酶水配制）
- Qubit dsDNA HS Assay（双链DNA高灵敏度检测）试剂盒 (Invitrogen, Q32851)
- Qubit™ 分析管 (Invitrogen, Q32856)
器材
- 盛有冰的冰桶
- 迷你离心机
- 计时器
- 热循环仪
- 磁力架
- Hula混匀仪（低速旋转式混匀仪）
- P1000 移液枪和枪头
- P200 移液枪和枪头
- P100 移液枪和枪头
- P20 移液枪和枪头
- P2 移液枪和枪头
- 多通道移液枪
- Qubit荧光计（或用于质控检测的等效仪器）
请注意： 以上列出的耗材和器材适用于标准的建库工作流程。如您将此试剂盒应用于其他工作流程，可能需要额外的第三方试剂。
