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免扩增条形码试剂盒-24 V14
SQK-NBD114.24

一款为长读长和高原始序列准确率众数(Q20+,即99%及以上)量身打造的测序试剂盒,可灵活运用于各种混样建库方案。

本试剂盒采用我们最新推出的试剂盒14系列试剂。

3发布
  • Oxford Nanopore Technologies 的产品已度过早期试用阶段
  • 用户可通过联系我们的客服提供反馈
  • 质保期延长至1-3个月
  • 产品不断演化,在升级前3个月内发布预告
  • 商店中显示交货时间
  • 产品视供货情况而定

Information

我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒:

  • 希望为24个以内的样本混样测序以降低单个样本的测序成本
  • 希望原始序列准确度中位数达到Q20及以上(99%+)
  • 希望获得互补双链测序数据
  • 希望通过优化测序实验以提高准确率和产出量
  • 希望通过免扩增的方式混样建库,以保留碱基修饰等信息
  • 需要控制读长
  • 希望利用上游处理工序(如片段大小选择或全基因组扩增)以获得长读长

请注意:使用本试剂盒,您需要购买额外的第三方试剂:详情请见“第三方材料”板块。

当单张测序芯片能产出的总数据量高于单个样本所需数据量时,将多个样本混样测序再进行条码拆分,可提高芯片的利用效率,并节省单个样本的测序支出。

免扩增条形码试剂盒-24 V14的特点:

特征详情
制备时间140 分钟
起始材料要求• 如起始材料为gDNA,则每个样本 400-1000 ng
• 如为扩增子,则每个样本 200 fmol (1 kb 扩增子对应130 ng)
是否需要PCR不需要
片段化可选
读长等于片段长度
试剂盒所用试剂试剂盒14系列试剂(V14)
相关实验指南基因组DNA连接法测序 - 免扩增条形码测序试剂盒-24 V14
扩增子连接法测序 - 扩增条形码测序试剂盒-24 V14
DNA连接法建库测序 V14 - 双条码 (SQK-NBD114.24 联合 EXP-PBC096)
流感病毒全基因组连接法测序 V14 (SQK-NBD114.24 或 SQK-NBD114.96)
基因组DNA连接法测序 - 腺相关病毒测序 (SQK-NBD114.24)
包装规格6个反应
稳定性• 运输温度 2–8°C
• 长期存储温度 -20°C
• 此早期试用产品的质保期为交付之日起一个月内。

免扩增条码测序试剂盒-24 V14 内含24种不同条码序列,可作为独立试剂盒用于双链DNA样本(例如,基因组DNA及扩增子)的免扩增混样测序。

使用本试剂盒制备文库的方法与使用连接测序试剂盒相似:首先,使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对gDNA进行修复(请注意:如使用扩增子作为起始材料,则省略DNA修复步骤)和dA尾添加;接着将条形码接头的dT端与DNA的dA尾端连接;然后将带有不同条形码序列的样本混合,再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。

试剂盒经过优化,与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时,测序产出量高且准确率不低于99% (Q20+)。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂,以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。

试剂盒14系列亦沿用了之前产品的优势,例如:接头的核酸链捕获率更高,因此测序芯片的文库上样量更低;接头采用能量稳固技术,免去用户在操作用时较长的测序实验时,中途向芯片添加额外能量。

如果实验需要长读长,我们建议您使用全长基因组DNA,而非片段化DNA。请注意:如需长读长,则起始材料中必须含有长片段。我们建议您使用Nanodrop测量A260/280 及 A260/230以确定样本纯度,且比例应满足以下标准:

  • A260/280 = 1.8
  • A260/230 = 2.0-2.2

免扩增条形码试剂盒-24 V14 兼容多种上游核酸处理工序,例如全基因组扩增(当样本量低于1 ng 时)及片段大小筛选(例如使用我们的短片段消除试剂盒(EXP-SFE001)富集特定长度的序列片段)。鉴于片段大小筛选对DNA消耗较大,如采用此步骤,我们建议您提高起始DNA的用量。

MinKNOW、Guppy和EPI2ME支持混样测序数据的条码拆分,并按条码将序列片段分类分配至相应文件夹。

更多信息:

起始核酸量较少,或样本纯度较低时,会影响文库制备效率并降低测序通量。当样本量不足时,可以采用PCR扩增的方式增加起始核酸量。

运输和物流:

测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。

大陆地区工作日均可发货,根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。

Workflow

使用本试剂盒制备文库的方法与使用连接测序试剂盒相似:首先,使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对gDNA进行修复(请注意:如使用扩增子作为起始材料,则省略DNA修复步骤)和dA尾添加;接着将条形码接头的dT端与DNA的dA尾端连接;然后将带有不同条形码序列的样本混合,再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。

Chinese Native Barcoding Kit 24 (Q20+) Workflow

What's in the box

免扩增条形码测序试剂盒-24 V14 内含24种不同条码序列,可用于6个测序反应。

请注意: 我们正在将部分试剂的包装形式由单次管装改为瓶装,并减低EDTA的浓度。

管装试剂及高浓度装EDTA:

SQK-NBD114.24

名称缩写管盖颜色管数每管溶液体积 (μl)
免扩增条形码NB01-24透明24 (每种条形码一管)20 μl
DNA参照DCS黄色235
免扩增接头NA绿色140
测序缓冲液SB红色1700
文库颗粒LIB粉色1600
文库溶液LIS白色管盖,粉色标签1600
洗脱缓冲液EB黑色1500
AMPure XP 磁珠AXP琥珀色41,200
长片段缓冲液LFB橙色11,800
短片段缓冲液SFB透明11,800
EDTA†EDTA透明1700
测序芯片冲洗液FCF蓝色61,170
测序芯片系绳FCT紫色1200

请注意: 本产品包含由贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter, Inc)生产的 AMPure XP 试剂,并可与试剂盒一起于-20°C 下储存(试剂稳定性将不受损害)。

† 较高浓度装EDTA的瓶盖为透明色。


部分试剂改为瓶装,且EDTA浓度较低:

SQK-NBD114.24 bottle format

名称缩写管盖颜色管数每管溶液体积 (μl)
免扩增条形码NB01-24透明24 (每种条形码一管)20 μl
DNA参照DCS黄色235
免扩增接头NA绿色140
测序缓冲液SB红色1700
文库颗粒LIB粉色1600
文库溶液LIS白色管盖,粉色标签1600
洗脱缓冲液EB黑色2500
AMPure XP 磁珠AXP浅青色16,000
长片段缓冲液LFB橙色11,800
短片段缓冲液SFB透明11,800
EDTA‡EDTA蓝色1700
测序芯片冲洗液FCF浅蓝色18,000
测序芯片系绳FCT紫色1200

‡ 较低浓度装EDTA的瓶盖为蓝色。

请注意: 本产品包含由贝克曼库尔特公司(Beckman Coulter, Inc)生产的 AMPure XP 试剂,并可与试剂盒一起于-20°C 下储存(试剂稳定性将不受损害)。

请注意: DNA参照(DCS)是一段可比对到Lambda基因组的3'端、长度为3.6 kb 的标准扩增子。

3rd party materials

耗材

  • NEBNext®快速连接反应缓冲液(NEB 目录号 B6058)

  • 供Oxford Nanopore Technologies® 连接测序使用的NEBNext® 配套模块(目录号E7180S)。

  • 或者,您也可以使用以下三种NEBNext®产品代替上述两种产品:

    • NEBNext FFPE修复混合液 (M6630)
    • NEBNext Ultra II末端修复/ dA尾添加模块 (E7546)
    • NEBNext 快速连接模块 (E6056)
  • NEB Blunt/TA 连接酶预混液(M0367)

  • 1.5ml Eppendorf DNA LoBind离心管

  • 0.2ml薄壁PCR管

  • 无核酸酶水(如ThermoFisher,目录号AM9937)

  • 新制备的80%乙醇(用无核酸酶水配制)

  • Qubit™ 分析管 (ThermoFisher Q32856)

  • Qubit dsDNA HS Assay(双链DNA高灵敏度检测)试剂盒

  • (非必需)牛血清白蛋白 (BSA) (50 mg/mL) (例如Invitrogen™ UltraPure™ BSA (50 mg/mL) 目录号 AM2616)

器材

  • Hula混匀仪(低速旋转式混匀仪)
  • 迷你离心机
  • 磁力架
  • 涡旋混匀仪
  • 热循环仪
  • 多通道移液枪
  • P1000 移液枪和枪头
  • P200 移液枪和枪头
  • P100 移液枪和枪头
  • P20 移液枪和枪头
  • P10 移液枪和枪头
  • P2 移液枪和枪头
  • 盛有冰的冰桶
  • 计时器
  • Qubit荧光计 (或用于质控检测的等效仪器)

可选器材

  • Agilent生物分析仪(或等效仪器)
  • Eppendorf 5424离心机(或等效仪器)

Compatibility

免扩增条形码测序试剂盒-24 V14 可与以下产品联用:

试剂盒

  • 免扩增条形码辅助试剂盒 V14 (EXP-NBA114)
  • 测序芯片清洗试剂盒(EXP-WSH004)
  • 测序芯片预处理试剂盒 V14 (EXP-FLP004)
  • 测序芯片预处理试剂盒-XL(EXP-FLP004-XL)
  • 测序辅助扩展包 V14 (EXP-AUX003)
  • PCR条形码扩展包1-96 (EXP-PBC096)
  • 长片段缓冲液扩展包(EXP-LFB001)
  • 短片段缓冲液扩展包(EXP-SFB001)

测序芯片

R10.4.1.

  • FLO-MIN114
  • FLO-PRO114M
  • FLO-FLG114

测序设备

  • MinION Mk1B
  • MinION Mk1C
  • GridION
  • PromethION