Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望为24个以内的样本混样测序以降低单个样本的测序成本
- 希望原始序列准确度中位数达到Q20及以上（99%+）
- 希望通过优化测序实验以提高准确率和产出量
- 希望通过免扩增的方式混样建库，以保留碱基修饰等信息
- 需要控制读长
- 希望利用上游处理工序（如片段大小选择或全基因组扩增）以获得长读长
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
当单张测序芯片能产出的总数据量高于单个样本所需数据量时，将多个样本混样测序再进行条码拆分，可提高芯片的利用效率，并节省单个样本的测序支出。
免扩增条形码试剂盒-24 V14的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | 140 分钟 |
| 起始材料要求 | • 如起始材料为gDNA，则每个样本 400-1000 ng
• 如为扩增子，则每个样本 200 fmol （1 kb 扩增子对应130 ng） |
| 是否需要PCR | 不需要 |
| 片段化 | 可选 |
| 读长 | 等于片段长度 |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒14系列试剂（V14） |
| 相关实验指南 | 请参阅 Protocols（实验指南） 一节。 |
| 包装规格 | 6个反应 |
| 储存 | -20°C 到 -30°C |
| 稳定性 | 本试剂盒在运输过程中可在不高于 25ºC 的条件下稳定保存 7 天。收到后，请置于 -20°C 至 -30°C 条件下保存。
Oxford Nanopore Technologies 规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
免扩增条码测序试剂盒-24 V14 内含24种不同条码序列，可作为独立试剂盒用于双链DNA样本（例如，基因组DNA及扩增子）的免扩增混样测序。
使用本试剂盒制备文库的方法与使用连接测序试剂盒相似：首先，使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对gDNA进行修复（请注意：如使用扩增子作为起始材料，则省略DNA修复步骤）和dA尾添加；接着将条形码接头的dT端与DNA的dA尾端连接；然后将带有不同条形码序列的样本混合，再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。
试剂盒经过优化，与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，测序产出量高且准确率不低于99% (Q20+)。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
试剂盒14系列亦沿用了之前产品的优势，例如：接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
如果实验需要长读长，我们建议您使用全长基因组DNA，而非片段化DNA。请注意：如需长读长，则起始材料中必须含有长片段。我们建议您使用Nanodrop测量A260/280 及 A260/230以确定样本纯度，且比例应满足以下标准：
- A260/280 = 1.8
- A260/230 = 2.0-2.2
免扩增条形码试剂盒-24 V14 兼容多种上游核酸处理工序，例如全基因组扩增（当样本量低于1 ng 时）及片段大小筛选（例如使用我们的短片段消除试剂盒（EXP-SFE001）富集特定长度的序列片段）。鉴于片段大小筛选对DNA消耗较大，如采用此步骤，我们建议您提高起始DNA的用量。
MinKNOW、Dorado和EPI2ME支持混样测序数据的条码拆分，并按条码将序列片段分类分配至相应文件夹。
更多信息：
起始核酸量较少，或样本纯度较低时，会影响文库制备效率并降低测序通量。当样本量不足时，可以采用PCR扩增的方式增加起始核酸量。
运输和物流:
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
使用本试剂盒制备文库的方法与使用连接测序试剂盒相似：首先，使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对gDNA进行修复（请注意：如使用扩增子作为起始材料，则省略DNA修复步骤）和dA尾添加；接着将条形码接头的dT端与DNA的dA尾端连接；然后将带有不同条形码序列的样本混合，再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。
What's in the box
免扩增条形码测序试剂盒-24 V14 内含24种不同条码序列，可用于6个测序反应。
注意： 我们正在更新免扩增条形码建库试剂盒，新版将提供更大体积的短片段缓冲液（SFB）。
新版试剂盒：短片段缓冲液体积增加（SFB）
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| DNA参照 | DCS | 黄色 | 2 | 35 |
| 免扩增接头 | NA | 绿色 | 1 | 40 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 1 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 2 | 500 |
| AMPure XP 磁珠 | AXP | 透明管盖，浅青绿色标签 | 1 | 6,000 |
| 长片段缓冲液 | LFB | 橙色 | 1 | 1,800 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明 | 1 | 13,000 |
| EDTA | EDTA | 蓝色 | 1 | 700 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 1 | 8,000 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 紫色 | 1 | 200 |
| 免扩增条形码孔板 | NB01-24 | - | 两板，每板三套条形码组合 | 每孔5µl |
旧版试剂盒：较低体积的短片段缓冲液（SFB）
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| DNA参照 | DCS | 黄色 | 2 | 35 |
| 免扩增接头 | NA | 绿色 | 1 | 40 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 1 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 2 | 500 |
| AMPure XP 磁珠 | AXP | 透明管盖，浅青绿色标签 | 1 | 6,000 |
| 长片段缓冲液 | LFB | 橙色 | 1 | 1,800 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明 | 1 | 1,800 |
| EDTA | EDTA | 蓝色 | 1 | 700 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 1 | 8,000 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 紫色 | 1 | 200 |
| 免扩增条形码孔板 | NB01-24 | - | 两板，每板三套条形码组合 | 每孔5µl |
请注意： 本产品包含由贝克曼库尔特公司（Beckman Coulter, Inc）生产的 AMPure XP 试剂，并可与试剂盒一起于-20°C 下储存（试剂稳定性将不受损害）。
请注意： DNA参照（DCS）是一段可比对到Lambda基因组的3'端、长度为3.6 kb 的标准扩增子。
Compatibility
免扩增条形码测序试剂盒-24 V14 可与以下产品联用：
试剂盒
- 免扩增条形码辅助试剂盒 V14 (EXP-NBA114)
- 测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）
- 测序芯片清洗试剂盒 XL (EXP-WSH004-XL)
- 测序芯片预处理试剂盒 V14 (EXP-FLP004)
- 测序芯片预处理试剂盒-XL（EXP-FLP004-XL）
- 测序辅助扩展包 V14 (EXP-AUX003)
- 测序辅助扩展包 XL (EXP-AUX003-XL)
- PCR条形码扩展包1-96 (EXP-PBC096)
- 短片段去除试剂盒（EXP-SFE001）
- 长片段缓冲液扩展包（EXP-LFB001）
- 短片段缓冲液扩展包（EXP-SFB001）
- Lambda 标准品扩展包（EXP-CTL001）
测序芯片
- FLO-MIN114
- FLO-PRO114M
- FLO-FLG114
测序设备
- Flongle
- MinION
- GridION
- PromethION
