Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望优化测序实验通量
- 希望对 2-3 个样本进行全基因组测序 (WGS)
- 希望通过免扩增的方式混样建库，以保留碱基修饰等信息
- 需要控制读长
- 希望利用上游处理工序（如片段大小选择或全基因组扩增）
- 希望使用多通道移液枪或移液机器人同时处理多个样本
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | 150 分钟手动建库，245 分钟自动建库 |
| 起始材料要求 | 每个样本 1 µg gDNA |
| 是否需要PCR | 不需要 |
| 片段化 | 可选； 推荐起始量为100 - 500 ng |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂 盒14系列 |
| 读长 | 等于片段长度 |
| 相关实验指南 | • 基因组DNA连接法测序-混样连接测序试剂盒-XL V14 (SQK-MLK114.96-XL) |
| 包装大小 | 多达48个反应
选项：
• 如在每张测序芯片上为两个样本测序，则可支持48张测序芯片上的48个测序反应。
• 如在每两张芯片上为三个样本测序，则可支持64张测序芯片上的32个测序反应。 |
| 稳定性 | 运输温度 2–8℃
长期存储温度 -20℃
Oxford Nanopore Technologies规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
作为一款独立试剂盒，混样连接测序试剂盒-XL V14 内含96种不同条形码，可为基因组DNA和扩增子等双链DNA样本在免扩增的条件下添加条码。试剂盒提供的少样本混样建库方案，为全基因组测序 (WGS) 的应用提供了更简单的工作流程，方便用户鉴别突变常见和易发区域。
该试剂盒采用最新的试剂盒 14系列试剂，当与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，测序产出量高且原始序列准确率中位数不低于99% (Q20+)。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
其它更新包括：接头的gDNA捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
使用本试剂盒进行文库制备的方法与使用连接法建库测序试剂盒相似：首先，使 用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对DNA末端进行修复和dA尾添加；接着将条形码接头的dT尾端与DNA的dA尾端连接；然后将带有不同条形码序列的样本混合，再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。
我们建议每个样本使用 1 μg gDNA。手动方案推荐用户于每张测序芯片上为两个样本测序，从而可在48张芯片上测序96个样本；亦或在每两张芯片上为三个样本测序，从而可在32张芯片上测序96个样本。
MinKNOW软件、独立的Guppy碱基识别工具和EPI2ME Labs均支持混样测序数据的条码拆分，并根据条码将序列片段分类分配至相应文件夹。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
使用本试剂盒制备文库的方法与使用连接测序试剂盒相似：首先，使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对gDNA末端进行修复和dA尾添加；接着将条形码接头的dT端与DNA的dA尾端连接；然后将带有不同条形码序列的样本混合，再将条形码接头的粘性末端与测序接头连接。
What's in the box
对每个混样连接测序试剂盒-XL V14 ：
- 如在每张测序芯片上为两个样本测序，则可支持48张测序芯片上的48个测序反应。
- 如在每两张测序芯片上为三个样本测序，则可支持64张测序芯片上的32个测序反应。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 免扩增接头 | NA | 绿色 | 1 | 320 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 4 | 1,700 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 4 | 1,800 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 4 | 1,800 |
| EDTA | EDTA | 透明 | 1 | 700 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 白色管盖，黑色标签 | 1 | 10,000 |
| 长片段缓冲液 | LFB | 白色管盖，橙色标签 | 1 | 20,000 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 白色管盖 | 6 | 15,500 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 白色管盖，紫色贴纸 | 2 | 1,600 |
| 免扩增条形码 | NB01-96 | 不适用 | 1 盘 | 每孔 8 µl |
请注意: 声明：本产品包含由贝克曼库尔特公司（Beckman Coulter, Inc）生产的 AMPure XP 试剂，并可与试剂盒一起于-20°C 下储存（试剂稳定性将不受损害）。
Compatibility
混样连接测序试剂盒-XL V14 可与以下产品联用：
试剂盒：
- 测序芯片清洗试剂盒 (EXP-WSH004)
- 测序芯片清洗试剂盒 -XL (EXP-WSH004-XL)
- 测序辅助扩展包 V14 (EXP-AUX003)
- 免扩增条形码辅助扩展包 V14 (EXP-NBA114)
测序芯片
测序设备
