Information
本试剂盒为早期试用产品。
本试剂盒适用于具有以下需求的用户：
- 进行细菌 16S rRNA 和真菌 ITS 区域的全长测序
- 实现细菌属水平的鉴定
- 相较于连接法（ligation-based），在测序流程中更具速度与成本效益的优势
- 采用无片段化（fragmentation-free）工作流程，以完整保留扩增子序列
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
*在单测序芯片上混样测序，可有效降低单个样本的测序成本。
微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14 可从提取的 gDNA 中扩增完整的 16S rRNA 或 ITS 基因，并完成文库构建。该试剂盒配备了升级版引物，能够实现多种样本类型的 16S rRNA 全长测序（用于细菌谱分析）和 ITS 测序（用于真菌谱分析）。此外，全新的文库制备体系还具备拓展性，未来将支持用户使用自定义引物（如 18S 及其他扩增子样品）。
请注意： 本试剂盒所采用的引物方案符合行业标准，分别覆盖完整的 16S rRNA 基因和 ITS rRNA 基因。但由于引物结合区域在不同物种间并非完全保守，无法保证对所有物种均能成功扩增。建议您开展对照实验，以确认所研究的目标物种是否能够借助本试剂盒所提供的引物实现扩增。如需进一步支持，请联系support@nanoporetech.com。
微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14 的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | 70 分钟 + ~60 分钟 PCR |
| 起始材料要求 | 每个样本 10 ng gDNA |
| 是否需要PCR | 需要 |
| 片段化 | 不需要 |
| 读长 | 全长 16S rRNA 基因和/或 ITS 区域 |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒14系列 |
| 相关实验指南 | 16S 与 ITS 微生物扩增子条形码测序试剂盒（SQK-MAB114.24） |
| 条码拆分选项 | • 微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14
• 测序芯片清洗试剂盒 |
| 包装大小 | 6次反应 |
| 稳定性 | 运输温度 2–8°C
长期存储温度 -20°C
Oxford Nanopore Technologies 规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
首先使用特异性 16S 或 ITS 引物 对 DNA 进行 PCR 扩增（未来版本将支持用户自定义引物）。单次实验可为多达 24 个扩增子样本添加条形码。该条形码包含 5′ 端标签，可在无需连接酶的情况下促进样本与快速测序接头的连接。
本测序试剂盒采用试剂盒14系列试剂，当与最新推出的纳米孔 R10.4.1 联用时，可进一步提升原始序列的中位准确率并增大数据产出。试剂盒内含测序芯片预处理液及测序试剂，均与 R10.4.1 纳米孔兼容。试剂盒14系列试剂具备更高的 gDNA 捕获效率，可降低测序芯片的文库上样量；同时，所用接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
本试剂盒受 EPI2ME wf-16S 工作流程支持，该流程可用于分析经微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14（SQK-MAB114.24）测序脚本产出的数据。Dorado 及 EPI2ME 软件支持混样测序数据的条码拆分，并按条形码将序列片段分类并分配至相应文件夹。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
首先使用特异性 16S 或 ITS 引物对 DNA 进行 PCR 扩增（未来版本将支持用户自定义引物）。单次实验可为多达 24 个扩增子样本添加条形码。该条形码包含 5′ 端标签，可在无需连接酶的情况下促进样本与快速测序接头的连接。
本试剂盒受 EPI2ME wf-16S 工作流程支持，该流程可用于分析经微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14（SQK-MAB114.24）测序脚本产出的数据。Dorado 及 EPI2ME 软件支持混样测序数据的条码拆分，并按条形码将序列片段分类并分配至相应文件夹。
What's in the box
微生物扩增子条形码测序试剂盒-24 V14 包含 24 种不同的条形码，可供制备6次测序文库。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 快速测序文库接头 | RA | 绿色 | 1 | 15 |
| 16S 引物 | 16S | 白色 | 1 | 800 |
| ITS 引物 | ITS | 白色 | 1 | 800 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明管盖, 白色色标签 | 2 | 1,800 |
| EDTA | EDTA | 蓝色 | 1 | 700 |
| 接头缓冲液 | ADB | 透明 | 1 | 100 |
| AMPure XP 磁珠 | AXP | 棕色 | 2 | 1,200 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 1 | 500 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 1 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 1 | 8,000 |
| 冲洗系绳 UL | FTU | 紫色 | 1 | 65 |
| 扩增子条形码 01-24 | AB24 | - | 板，每板三套条形码组合 | 每孔 5 μl |
请注意： 本产品包含由贝克曼库尔特公司（Beckman Coulter, Inc）生产的 AMPure XP 试剂，并可与试剂盒一起于-20°C 下储存（试剂稳定性将不受损害）。
3rd party materials
Consumables
- LongAmp Hot Start Taq 2X Master Mix (NEB, M0533)
- (Optional) Bovine Serum Albumin (BSA) (50 mg/ml) (e.g Invitrogen™ UltraPure™ BSA 50 mg/ml, AM2616)
- 1.5 ml Eppendorf DNA LoBind tubes
- 0.2 ml thin-walled PCR tubes
- Nuclease-free water (e.g. ThermoFisher, AM9937)
- Freshly prepared 80% ethanol in nuclease-free water
- Qubit dsDNA HS Assay Kit (Invitrogen, Q32851)
- Qubit™ Assay Tubes (Invitrogen, Q32856)
Equipment
- Ice bucket with ice
- Microfuge
- Timer
- Thermal cycler
- Magnetic rack
- Hula mixer (gentle rotator mixer)
- P1000 pipette with tips
- P200 pipette and tips
- P100 pipette and tips
- P20 pipette and tips
- P2 pipette and tips
- Multichannel pipette
- Qubit fluorometer (or equivalent for QC check)
Note: The above are 3rd party reagents required for the standard prep. For other workflows using this kit, extra 3rd party reagents may be required.
