Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望原始序列准确度众数达到Q20及以上（99%+）
- 希望通过优化测序实验以提高准确率
- 需要控制读长
- 希望利用上游处理工序（如片段大小选择或全基因组扩增）以获得长读长
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
连接测序试剂盒V14的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | ~65 分钟 |
| 起始材料要求 | 1 µg 双链基因组DNA 或100-200 fmol扩增子或cDNA |
| 是否需要PCR | 不需要 |
| 片段化 | 非必需；推荐的起始DNA用量为 100-500 ng |
| 读长 | 等于片段长度 |
| 相关实验指南 | 请参阅 Protocols（实验指南） 一节。 |
| 多样本测序选项 | • 免扩增条形码试剂盒-24 V14 (SQK-NBD114.24)
• 免扩增条形码试剂盒-96 V14 (SQK-NBD114.96)
• 连接法建库测序 V14 - PCR 条形码 (SQK-LSK114 联合 EXP-PBC001 或 EXP-PBC096)
• 混样连接测序试剂盒-XL V14 (SQK-MLK114.96-XL) |
| 包装大小 | 6次反应 |
| 储存 | -20°C 到 -30°C |
| 稳定性 | 本试剂盒在运输过程中可在不高于 25ºC 的条件下稳定保存 7 天。收到后，请置于 -20°C 至 -30°C 条件下保存。
Oxford Nanopore Technologies 规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
连接测序试剂盒V14可简单灵活地为双链DNA样本（例如gDNA，cDNA或扩增子）制备测序文库。流程包括：使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对DNA末端进行修复和dA尾添加；再将试剂盒中提供的测序接头连接至DNA末端。
试剂盒经过优化，与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，测序产出量高且准确率不低于99% (Q20+)。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
试剂盒14系列亦沿用了之前产品的优势，例如：接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
用户可使用1 μg 基因组DNA、或 100-200 fmol短片段DNA（例如扩增子或cDNA）作为起始核酸用量。如果实验需要长读长，我们建议您使用全长基因组DNA，而非片段化DNA。请注意：如需长读长，则起始材料中必须含有长片段。我们建议您使用Nanodrop测量A260/280 及 A260/230以确定样本纯度，且比例应满足以下标准：
- A260/280 = 1.8
- A260/230 = 2.0-2.2
连接测序试剂盒V14兼容多种上游核酸处理工序，例如目标序列捕获富集，全基因组扩增（当样本量低于1 ng 时）及片段大小筛选（使用我们的短片段消除试剂盒（EXP-SFE001），富集特定长度的片段）。
A) 单独使用连接测序试剂盒或搭配片段大小筛选（EXP-SFE001）为高分子量DNA建库测序时，所输出读长。B) 与EXP-SFE001联用产出的序列片段N50明显高于相同测序条件下，未经片段大小筛选的样本的N50。
免扩增的实验流程避免了扩增偏倚并保留了碱基修饰信息。使用纳米孔社区开发的工具即可对碱基修饰信息进行分析。
更多信息：
起始核酸量较少，或样本纯度较低时，会影响文库制备效率并降低测序通量。当样本量不足时，可以采用PCR扩增的方式增加起始核酸量。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
连接测序试剂盒可简单灵活地为双链DNA样本（例如gDNA，cDNA或扩增子）制备测序文库。流程包括：使用NEBNext FFPE DNA修复混合液和NEBNext末端修复/dA尾添加模块对DNA末端进行修复和dA尾添加；再将试剂盒中提供的测序接头连接至DNA末端。
What's in the box
此连接测序试剂盒V14可供制备六次文库。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| DNA 参照 | DCS | 黄色 | 1 | 35 |
| 连接接头 | LA | 绿色 | 1 | 40 |
| AMPure XP 磁珠 | AXP | 琥珀色 | 1 | 1,200 |
| 连接缓冲液 | LNB | 白色 | 1 | 200 |
| 长片段缓冲液 | LFB | 橙色 | 2 | 1,800 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明 | 2 | 1,800 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 1 | 500 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 1 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明管盖，浅蓝色标签 | 6 | 8000 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 紫色 | 1 | 200 |
请注意： 本产品包含由贝克曼库尔特公司（Beckman Coulter, Inc）生产的 AMPure XP 试剂，并可与试剂盒一起于-20°C 下储存（试剂稳定性将不受损害）。
请注意： DNA参照（DCS）是一段可比对到Lambda基因组3'端、长度为3.6 kb 的标准扩增子。
