Information

我们强烈推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：

• 不希望引入PCR偏倚
• 希望解析天然核糖核酸的碱基结构，如修饰碱基

请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。

直接RNA测序试剂盒的特点：

与将RNA逆转录为cDNA进行间接测序不同，直接RNA测序试剂盒（SQK-RNA004）对RNA本身进行测序。起始材料包括：带polyA尾的RNA或总RNA，例如真核生物mRNA和病毒RNA。

升级后试剂盒改善了在我们新推出的RNA测序芯片（FLO-MIN004RA and FLO-PRO004RA）上的测序产出，及原始序列准确率众数。该测序试剂盒中还包含测序芯片预处理试剂。该试剂经过重新调配，以与新的RNA测序芯片兼容。其它更新包括采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。

更多信息：

如实验并不侧重直接RNA测序带来的关键优势（碱基修饰识别及消除扩增偏倚），您可考虑使用当前产出通量更高的Oxford Nanopore cDNA试剂盒。

运输和物流：

测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。

大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。

Workflow

直接RNA测序试剂盒（SQK-RNA004）可为带polyA尾的RNA或总RNA测序。建库过程中，首先通过逆转录生成cDNA互补链。此cDNA链起稳定作用，以提高测序产出。然后将测序接头与RNA-cDNA杂交链连接，以备测序。

Protocols

• 直接RNA测序对照实验 (SQK-RNA004)
• 直接RNA测序 (SQK-RNA004)
• 目标RNA直接测序 (SQK-RNA004)

Safety and legal

直接RNA测序试剂盒（SQK-RNA004）的安全数据表

What's in the box

直接RNA测序试剂盒可供制备六次文库。

请注意： RNA CS（RCS）是校准链，其中包含自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中提取的烯醇化酶II YHR174W 。您可于此处获取相关的酵母FASTA参考文件。

3rd party materials

耗材

• 1.5ml Eppendorf DNA LoBind离心管
• 0.2 ml薄壁PCR管
• 无核酸酶水（如ThermoFisher，目录号AM9937）
• 新制备的70％乙醇（用无核酸酶水配制）
• Induro® 逆转录酶 (NEB, M0681)
• 10mM 脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）溶液（例如 NEB 目录号N0447）
• NEBNext®快速连接反应缓冲液（NEB目录号 B6058）
• 2M U/ml的T4 DNA连接酶 （NEB目录号 M0202T/M）
• 小鼠RNase抑制剂（NEB，M0314）
• Agencourt RNAClean XP磁珠（Beckman Coulter™, 目录号A63987）
• Qubit RNA HS Assay（RNA高灵敏度检测）试剂盒（ThermoFisher 目录号Q32851）
• Qubit dsDNA HS Assay（双链DNA高灵敏度检测）试剂盒（Invitrogen 目录号Q32856）

器材

• Hula混匀仪（低速旋转式混匀仪）
• 适用于1.5 ml Eppendorf离心管的磁力架
• 迷你离心机
• 涡旋混匀仪
• 盛有冰的冰桶
• 计时器
• 热循环仪
• Qubit荧光计（或用于质控检测的等效仪器）
• P1000移液枪和枪头
• P100移液枪和枪头
• P20移液枪和枪头
• P10移液枪和枪头
• P2移液枪和枪头
• Eppendorf 5424 离心机（或等效器材）

请注意： 上述第三方试剂为标准建库流程所需。如您将该试剂盒应用于其它工作流程，可能需要额外的第三方试剂。

Compatibility

直接RNA测序试剂盒可与以下产品联用：

试剂盒

• 测序芯片清洗试剂盒 (EXP-WSH004)

请注意： 测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）可用于去除测序芯片内的现有文库，以便为芯片再次上样。但该试剂盒中的核酸酶无法降解RNA。

测序芯片

• FLO-MIN004RA
• FLO-PRO004RA

测序设备

• MinION Mk1B
• MinION Mk1C
• GridION
• PromethION