Information
我们强烈推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 不希望引入PCR偏倚
- 希望解析天然核糖核酸的碱基结构，如修饰碱基
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
直接RNA测序试剂盒的特点：
与将RNA逆转录为cDNA进行间接测序不同，直接RNA测序试剂盒（SQK-RNA004）对RNA本身进行测序。起始材料包括：带polyA尾的RNA或总RNA，例如真核生物mRNA和病毒RNA。
升级后试剂盒改善了在我们新推出的RNA测序芯片（FLO-MIN004RA and FLO-PRO004RA）上的测序产出，及原始序列准确率众数。该测序试剂盒中还包含测序芯片预处理试剂。该试剂经过重新调配，以与新的RNA测序芯片兼容。其它更新包括采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
更多信息：
如实验并不侧重直接RNA测序带来的关键优势（碱基修饰识别及消除扩增偏倚），您可考虑使用当前产出通量更高的Oxford Nanopore cDNA试剂盒。
我们还提供适用于直接 RNA 测序的混样方案：直接 RNA 条形码试剂盒 24（SQK-DRB004.24）。该试剂盒适用于对单样本数据量要求不高，并希望在简化文库制备流程的同时降低单个样本成本的用户。如需了解更多信息，请访问 Nanopore 商城，或联系您的 Oxford Nanopore Technologies 客户代表。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒 均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
直接RNA测序试剂盒（SQK-RNA004）可为带polyA尾的RNA或总RNA测序。建库过程中，首先通过逆转录生成cDNA互补链。此cDNA链起稳定作用，以提高测序产出。然后将测序接头与RNA-cDNA杂交链连接，以备测序。
What's in the box
直接RNA测序试剂盒可供制备六次文库。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 溶液体积 (μl) |
|---|
| 逆转录接头 | RTA | 蓝色 | 1 | 10 |
| RNA连接接头 | RLA | 绿色 | 1 | 45 |
| RNA 参照品 | RCS | 黄色 | 1 | 25 |
| 清洗缓冲液 | WSB | 橙色 | 2 | 1,200 |
| RNA 洗脱缓冲液 | REB | 黑色 | 1 | 300 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| RNA 冲洗系绳 | RFT | 紫罗兰色 | 1 | 200 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 白色 | 1 | 8,000 |
请注意： RNA CS（RCS）是对照链，其中包含自酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae中提取的烯醇化酶II YHR174W 。您可于此处获取相关的酵母FASTA参考文件。
3rd party materials
耗材
- 1.5ml Eppendorf DNA LoBind离心管
- 0.2 ml薄壁PCR管
- 无核酸酶水（如ThermoFisher，目录号AM9937）
- 新制备的70％乙醇（用无核酸酶水配制）
- Induro® 逆转录酶 (NEB, M0681)
- 10mM 脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）溶液（例如 NEB 目录号N0447）
- NEBNext®快速连接反应缓冲液（NEB目录号 B6058）
- 2M U/ml的T4 DNA连接酶 （NEB目录号 M0202T/M）
- 小鼠RNase抑制剂（NEB，M0314）
- Agencourt RNAClean XP磁珠（Beckman Coulter™, 目录号A63987）
- Qubit RNA HS Assay（RNA高灵敏度检测）试剂盒（ThermoFisher 目录号Q32852）
- Qubit dsDNA HS Assay（双链DNA高灵敏度检测）试剂盒（Invitrogen 目录号Q32851）
- Qubit™ 分析管 (Invitrogen 目录号Q32856)
器材
- Hula混匀仪（低速旋转式混匀仪）
- 适用于1.5 ml Eppendorf离心管的磁力架
- 迷你离心机
- 涡旋混匀仪
- 盛有冰的冰桶
- 计时器
- 热循环仪
- Qubit荧光计（或用于质控检测的等效仪器）
- P1000移液枪和枪头
- P100移液枪和枪头
- P20移液枪和枪头
- P10移液枪和枪头
- P2移液枪和枪头
- Eppendorf 5424 离心机（或等效器材）
请注意： 上述第三方试剂为标准建库流程所需。如您将该试剂盒应用于其它工作流程，可能需要额外的第三方试剂。
Compatibility
直接RNA测序试剂盒可与以下产品联用：
试剂盒
请注意： 测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）可用于去除测序芯片内的现有文库，以便为芯片再次上样。但该试剂盒中的核酸酶无法降解RNA。
测序芯片
- FLO-MIN004RA
- FLO-PRO004RA
测序设备
- MinION
- GridION
- PromethION
