Information
我们强烈推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望通过混样建库降低单样本成本
- 不希望引入 PCR 偏倚
- 希望解析天然核糖核酸的碱基结构，如修饰碱基
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
直接 RNA 条形码测序试剂盒-24 的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | ~370 分钟 |
| 起始材料要求 | 450 fmol poly(A)+ 富集 RNA，或 450 fmol 经 poly(A) 加尾的 IVT 转录本 RNA（总体积 5 μl） |
| 是否需要PCR | 不需要 |
| 是否需要片段化 | 不需要 |
| 读长 | 与RNA长度相同 |
| 相关实验指南 | • 直接 RNA 测序 - 条形码混样建库（SQK-DRB004.24） |
| 包装大小 | 6 次建库反应 |
| 稳定性 | 本试剂盒在运输过程中可在不高于 25ºC 的条件下稳定保存 7 天。收货后请按试剂盒标签标注的条件保存。
产品保质期为自收货之日起 3 个月。 |
直接 RNA 条形码测序试剂盒-24（SQK-DRB004.24）支持为多个天然 RNA 样本添加条形码并建库测序，无需先将 RNA 转换为 cDNA。起始材料可为 poly(A)+ 富集 RNA 样本或经 poly(A) 加尾的 IVT 转录本样本。
请注意： 本试剂盒已针对以下混样规模进行优化： 4–8 个 poly(A)+ 富集 RNA 样本，或 12-24 个经 poly(A) 加尾的 IVT 转录本样本。混样数量应结合单样本所需的测序产出确定。
该试剂盒在我们的 RNA 测序芯片（FLO-MIN004RA 和 FLO-PRO004RA）上可实现更高的测序产出，并提升原始序列准确率众数。试剂盒包含RNA 测序芯片专用的预处理试剂，并采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
更多信息：
在不侧重直接RNA测序关键优势（碱基修饰识别及降低扩增偏倚）的应用场景中，建议您考虑使用单次实验产出更高的 Oxford Nanopore cDNA 建库试剂盒（SQK-PCS114 和 SQK-PCB114.24）。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
直接 RNA 条形码测序试剂盒-24（SQK-DRB004.24）适用于为多个天然 RNA 样本进行混样测序。该试剂盒以 poly(A)+ 富集 RNA 或经 poly(A) 加尾的 IVT 转录本为起始材料。首先，为每个 RNA 样本连接逆转录条形码，并将样本混合。随后对带条形码的 RNA 进行逆转录，完成第一链合成，以提高 RNA 的稳定性。接着，通过 USER 消化反应去除未正确连接到 RNA 的逆转录条形码突出端，以避免条形码交叉污染。最后，将测序接头连接至 RNA–cDNA 杂合分子上，进行测序。
What's in the box
直接 RNA 条形码测序试剂盒-24（SQK-DRB004.24）包含 24 种条形码，并可支持最多 6 次建库反应。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| RNA 条形码接头 | RBA | 绿色 | 1 | 45 |
| RNA 洗脱缓冲液 | REB | 黑色 | 1 | 300 |
| 置换链 | DS | 橙色 | 1 | 10 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 文库溶液 | LIS | 白色瓶盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| EDTA | EDTA | 蓝色 | 1 | 700 |
| RNA 冲洗系绳 | RFT | 紫色 | 1 | 200 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明瓶 | 1 | 13,000 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明瓶盖，浅蓝色标签 | 1 | 8,000 |
| 逆转录条形码孔板 | RTB01-24 | - | 两板，每板三套条形码组合 | 每孔 5µl |
3rd party materials
耗材
- T3 DNA 连接酶（NEB，M0317）
- Induro® 逆转录酶 和 5x Induro® 逆转录反应缓冲液（NEB，M0681）
- 小鼠 RNase 抑制剂（NEB，M0314）
- USER （尿嘧啶-特异性切除试剂) 酶（NEB, M5505L）
- Agencourt RNAClean XP磁珠 （Beckman Coulter®，A63987）
- 10mM 脱氧核糖核苷三磷酸（dNTP）溶液（例如 NEB N0447）
- 5M 无 RNA 酶的氯化钠溶液 (ThermoFisher，10609823 或等效产品)
- NEBNext 高起始量 Poly(A) mRNA 分离试剂盒（NEB，E3370）
- 无核酸酶水（如ThermoFisher，目录 号AM9937）
- Qubit™ RNA HS Assay（RNA高灵敏度检测）试剂盒（ThermoFisher，Q32852）
- Qubit™ dsDNA HS Assay （双链DNA高灵敏度检测）试剂盒（ThermoFisher，Q32851）
- Qubit™ 分析管（Invitrogen, Q32856）
- 0.2 ml 薄壁 PCR 离心管 或 0.2 ml 96 孔 PCR 板
- 1.5 ml Eppendorf DNA LoBind 离心管
- PCR 封板膜
器材
- 涡旋混匀仪
- 迷你离心机
- Hula混匀仪（低速旋转式混匀仪）
- 适用于1.5ml Eppendorf 离心管的磁力架
- Eppendorf 5424 离心机（或等效器材）
- 盛有冰的冰桶
- 计时器
- 热循环仪
- Qubit™ 荧光计（或用于质控检测的等效仪器）
- P1000 移液枪和枪头
- P200 移液枪和枪头
- P100 移液枪和枪头
- P20 移液枪和枪头
- P10 移液枪和枪头
- P2 移液枪和枪头
请注意： 上述第三方试剂为标准建库流程所需。如您将该试剂盒应用于其它工作流程，可能需要额外的第三方试剂。
Compatibility
直接 RNA 条形码测序试剂盒-24 可与以下产品联用：
试剂盒
- 直接 RNA 辅助扩展包（EXP-DRA004）
- RNA 参照品扩展包（EXP-RCS001）
测序芯片
- FLO-MIN004RA
- FLO-PRO004RA
测序设备
- MinION
- GridION
- PromethION
