Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 起始样本有限
- 希望提高测序实验产出量
- 希望识别并量化全长转录本
- 希望分析差异基因表达
- 希望鉴定并定量异构体、剪接变体及融合转录本
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
PCR-cDNA 测序试剂盒的特点：
PCR-cDNA测序试剂盒可为低至4 ng的起始材料（即带poly-A尾的RNA）制备用于纳米孔测序的cDNA文库。用户亦可使用200ng 未经poly-A尾富集操作的总RNA作为起始材料，但可能需对实验条件进行额外优化。
实验通过链转换筛选出可用于剪接变体识别的全长转录本。首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸，对含poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。再借助含5’端标签的引物，PCR扩增合成双链cDNA。该标签可促成样本与快速测序接头的快速接合（不依赖连接酶）。
本cDNA试剂盒（“试剂盒11”系列）内所含的快速测序文库接头 T（RAP T）具有以下两个主要特征：一，接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低。二，接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
此试剂盒内亦包含cDNA逆转录接头和逆转录引物，旨在从转录本末端合成cDNA，从而减少逆转录过程中的序列交叠，并方便用户测量 poly-A 尾的长度。
运输和物流:
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸，对含poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。再借助含5’端标签的引物，PCR扩增合成双链cDNA。该标签可促成样本与快速测序接头的快速接合（不依赖连接酶）。
What's in the box
PCR-cDNA测序试剂盒（SQK-PCS111）可供制备六次文库。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 模板链转换引物 II | SSPII | 紫罗兰色 | 1 | 20 |
| 逆转录引物 | RTP | 黄色 | 1 | 10 |
| cDNA 逆转录接头 | CRTA | 琥珀色 | 1 | 10 |
| 快速测序文库接头 T | RAP T | 绿色 | 1 | 10 |
| 退火缓冲液 | AB | 橙色 | 1 | 10 |
| cDNA 引物 | cPRM | 白色管盖，灰色标签 | 1 | 40 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 1 | 500 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 棕色管盖，橙色标签 | 1 | 1,800 |
| 测序缓冲液 II | SBII | 红色 | 1 | 500 |
| 上样颗粒 II | LBII | 粉色 | 1 | 360 |
| 上样溶液 | LS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 400 |
| 冲洗缓冲液 | FB | 蓝色 | 6 | 1,170 |
| 冲洗系绳 | FLT | 白色管盖，紫色标签 | 1 | 200 |
