Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 起始样本有限
- 希望优化测序实验，以提高测序产出
- 希望识别并量化全长转录本
- 希望分析差异基因表达
- 希望鉴定并定量异构体、剪接变体及融合转录本
本品为一款早期试用产品。
如需有关早期试用计划的更多信息，请参阅 本文了解产品的不同发布阶段
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
cDNA-PCR 测序试剂盒 V14 的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | 225 分钟 + PCR |
| 起始材料要求 | 10 ng 含poly-A尾的RNA 或 500ng总RNA |
| 是否需要 逆转录 | 需要 |
| 是否需要PCR | 需要 |
| 读长 | 通过PCR扩增富集的全长cDNA |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒14系列试剂 |
| 相关实验指南 | cDNA-PCR 测序 V14 (SQK-PCS114) |
| 多样本测序选项 | 测序芯片清洗试剂盒 |
| 包装大小 | 6次反应 |
| 稳定性 | 运输温度 2–8°C
长期存储温度 -20°C
Oxford Nanopore Technologies规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
PCR-cDNA测序试剂盒可为低至10ng的起始材料（即带poly-A尾的RNA）制备用于纳米孔测序的cDNA文库。用户亦可使用500ng未经poly-A尾富集操作的总RNA作为起始材料，但可能需对实验条件进行额外优化。
实验通过链转换的方法选择全长转录本，并在此过程中引入UMI（唯一分子标记），以协助鉴定和区分剪接变体。首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸对含有poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。随后，利用带有5'端标签的引物进行PCR扩增，合成双链cDNA。该标签可促成样本与快速测序接头的快速接合，而无需依赖连接酶。
该试剂盒采用最新的试剂盒 14系列试剂，当与我们最新推出的纳米孔R10.4.1联用时，原始序列准确率众数进一步提高且产出量增大。我们已重新调配测序芯片预处理试剂和测序试剂，以兼容经过改良的试剂盒14系列测序接头及R10.4.1纳米孔。
试剂盒14系列亦沿用了之前产品的优势，例如：接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低；接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
此试剂盒内亦包含cDNA逆转录接头和逆转录引物，旨在从转录本末端合成cDNA，从而减少逆转录过程中的序列交叠，并方便用户测量 poly-A 尾的长度。同时，新增的PCR后洗涤步骤有助于减少在使用质量较低的样本时出现的短片段伪影。
运输和物流:
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸，对含poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。再借助含5’端标签的引物，PCR扩增合成双链cDNA。该标签可促成样本与快速测序接头的快速接合（不依赖连接酶）。
What's in the box
cDNA-PCR测序试剂盒 V14（SQK-PCS114）可供制备六次文库。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 模板链转换引物 II | SSPII | 蓝紫色 | 1 | 20 |
| 逆转录引物 | RTP | 黄色 | 1 | 10 |
| cDNA 逆转录接头 | CRTA | 琥珀色 | 1 | 10 |
| 退火缓冲液 | AB | 橙色 | 1 | 10 |
| 快速测序文库接头 | RA | 绿色 | 1 | 15 |
| 接头缓冲液 | ADB | 透明 | 1 | 100 |
| cDNA 引物 | cPRM | 白色管盖，灰色标签 | 1 | 40 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 1 | 500 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 透明 | 1 | 1,800 |
| 测序缓冲液 | SB | 红色 | 1 | 700 |
| 文库颗粒 | LIB | 粉色 | 1 | 600 |
| 文库溶液 | LIS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 600 |
| 测序芯片系绳 | FCT | 紫色 | 1 | 200 |
| 测序芯片冲洗液 | FCF | 透明 | 1 | 8,000 |
