Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望混样测序以降低单个样本的测序成本
- 起始DNA量较少
- 需要一套简便的文库制备流程
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
当单张测序芯片能产出的总数据量高于单个样本所需数据量时，将多个样本混样测序再进行条码拆分，可提高芯片的利用效率，并节省用户对单个样本的测序支出。
快速PCR条形码试剂盒为低起始量gDNA（1-5 ng）的文库构建提供了最快速简便的方法，手动制备时间仅需约 15 分钟。
试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将含有引物结合位点的标签连接至酶切端。试剂盒内含12种引物，用于扩增各样本并为其添加条形码及5’标签。该标签可促成含条码样本与快速测序文库接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
快速PCR条形码测序试剂盒的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | 15 分钟 + PCR |
| 起始材料要求 | 1-5 ng gDNA |
| 是否需要PCR | 需要 |
| 片段化 | 基于转座酶 |
| 读长 | ~2 kb |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒9系列 |
| 相关实验指南 | DNA快速建库测序-PCR条形码 (SQK-RPB004) |
| 包装大小 | 6 次反应 |
| 稳定性 | 输温度 2–8℃
长期存储温度 -20°C
Oxford Nanopore Technologies规定产品质保期为交付之日起三个月内。 |
该试剂盒已经过优化，能为起始样本量有限的用户提供简便的文库制备流程。观察显示，PCR扩增生成的片段大小与扩增前起始DNA长度在很大程度上无关。使用Agilent生物分析仪分析PCR产物，在约2kb处出现峰值，对应纳米孔测序产出的~2kb读长。读长受制于建库方法，而非DNA聚合酶的持续合成能力。
使用快速PCR条形码测序试剂盒制备文库时的典型读长分布。
MinKNOW软件、独立的Guppy碱基识别工具和EPI2ME均支持混样测序数据的条码拆分，并根据条码将序列片段分类分配至相应文件夹。
更多信息：
如您希望更严格地把控PCR反应生成的片段长度，我们推荐您使用PCR条形码测序试剂盒。
当样本量不足时，可以采用PCR扩增的方式增加起始核酸量。而当样本纯度较低时，建库效率也会受到影响，此时可选择PCR特异性扩增成功连接PCR接头的分子，从而稀释或去除文库中的杂质。在大多数情况下，PCR扩增可大大提升由文库引起的低测序表现。当起始材料量低于1ng时，我们推荐您进行全基因组扩增。
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
快速PCR条形码试剂盒为低起始量gDNA（1-5 ng）的文库构建提供了最快速简便的方法，手动制备时间仅需约 15 分钟。
试剂盒的核心成分为转座酶。它能在切割模板分子的同时，将含有引物结合位点的标签连接至酶切端。试剂盒内含12种引物，用于扩增各样本并为其添加条形码及5’标签。该标签可促成含条码样本与快速测序文库接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
Protocols
DNA快速建库测序-PCR条形码 (SQK-RPB004)
请注册纳米孔社区账户，以获取上述实验指南。
What's in the box
快速PCR条形码测序试剂盒内含12种不同条形码序列。试剂盒内的条形码及试剂可用于构建六个含12枚样本的混样文库，即试剂盒可总共处理72个样本。
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 片段化反应试剂 | FRM | 棕色 | 3 | 30 |
| 快速测序文库接头 | RAP | 绿色 | 1 | 10 |
| 测序缓冲液 | SBQ | 红色 | 1 | 300 |
| 上样颗粒 | LB | 粉色 | 1 | 360 |
| 快速条形码引物 1-12 | RLB 01-12 | 透明 | 12 | 10 |
测序芯片预处理试剂盒将一并供应：
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 溶液体积 (μl) |
|---|
| 冲洗缓冲液 | FB | 蓝色 | 6 | 1.17 ml |
| 冲洗系绳 | FLT | 紫色 | 1 | 200 µl |
