Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 起始样本有限
- 希望混样测序以降低单个样本的测序成本
- 希望优化测序实验以提高产出
- 希望识别并量化全长转录本
- 希望分析差异基因表达
- 希望鉴定并定量异构体、剪接变体及融合转录本
本品为一款早期试用产品
如需有关早期试用计划的更多信息，请参阅 本文了解产品的不同发布阶段。
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
PCR-cDNA条形码测序试剂盒-24的特点：
| 特征 | 详情 |
|---|
| 制备时间 | ~210 分钟 + PCR |
| 起始材料要求 | 4 ng 含poly-A尾的RNA 或 200ng总RNA |
| 是否需要逆转录 | 需要 |
| 是否需要PCR | 需要 |
| 读长 | 通过PCR扩增富集的全长cDNA |
| 试剂盒所用试剂 | 试剂盒11系列试剂 |
| 相关实验指南 | PCR-cDNA 条形码测序试剂盒-24 (SQK-PCB111.24) |
| 多样本测序选项 | •测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）
•测序辅助扩展包（EXP-AUX001） |
| 包装大小 | 6次反应 |
当单张测序芯片能产出的总数据量高于单个样本所需数据量时，将多个样本混样测序再进行条码拆分，可提高芯片的利用效率，并节省单个样本的测序支出。
PCR-cDNA条码测序试剂盒可为多达24个样本制备用于纳米孔测序的cDNA文库。且起始材料（即带poly-A尾的RNA）的用量可低至4 ng。用户亦可使用200ng 未经poly-A尾富集操作的总RNA作为起始材料，但可能需对实验条件进行额外优化。
实验通过链转换筛选出可用于剪接变体识别的全长转录本。首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸，对含poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。试剂盒内含24对不同引物，用于生成并PCR扩增双链cDNA。扩增引物内含5'端标签，可促成样本与快速测序接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
本cDNA试剂盒（“试剂盒11”系列）内所含的快速测序文库接头 T（RAP T）具有以下两个主要特征：一，接头的核酸链捕获率更高，因此测序芯片的文库上样量更低。二，接头采用能量稳固技术，免去用户在操作用时较长的测序实验时，中途向芯片添加额外能量。
此试剂盒内亦包含cDNA逆转录接头和逆转录引物，旨在从转录本末端合成cDNA，从而减少逆转录过程中的序列交叠，并方便用户测量 poly-A 尾的长度。
运输和物流:
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
首先使用本试剂盒提供的寡核苷酸，对含poly-A尾的全长RNA进行互补链合成和链转换。试剂盒内含24对不同引物，用于生成并PCR扩增双链cDNA。扩增引物内含5'端标签，可促成样本与快速测序接头的快速接合（不依赖连接酶）。混合扩增后的带条码样本，并向其中加入快速测序文库接头，即可得到用于测序的文库。
What's in the box
PCR-cDNA条形码测序试剂盒-24提供24种不同条形码，试剂可供制备六次文库：
| 名称 | 缩写 | 管盖颜色 | 管数 | 每管溶液体积 (μl) |
|---|
| 模板链转换引物 II | SSPII | 蓝紫色 | 1 | 350 |
| 逆转录引物 | RTP | 黄色 | 1 | 200 |
| cDNA 逆转录接头 | CRTA | 琥珀色 | 1 | 200 |
| 退火缓冲液 | AB | 橙色 | 1 | 200 |
| 快速测序文库接头T | RAP T | 绿色 | 1 | 10 |
快速测序文库接头稀释缓冲液
(或接头缓冲液) | RDB
或（ADB） | 透明 | 1 | 100 |
| 洗脱缓冲液 | EB | 黑色 | 2 | 1,500 |
| 短片段缓冲液 | SFB | 白色 | 4 | 7,500 |
| 测序缓冲液 II | SBII | 红色 | 1 | 500 |
| 上样颗粒 II | LBII | 粉色 | 1 | 360 |
| 上样溶液 | LS | 白色管盖，粉色标签 | 1 | 400 |
| 条形码引物 1-24 | BP01-24 | 白色 | 24 | 10 |
| 冲洗缓冲液 | FB | 蓝色 | 6 | 1,170 |
| 冲洗系绳 | FLT | 白色管盖，紫色标签 | 1 | 200 |
Compatibility
PCR-cDNA条形码测序试剂盒-24 可与以下产品联用：
试剂盒
- 测序芯片清洗试剂盒（EXP-WSH004）
- 测序辅助扩展包（EXP-AUX002）
- 快速测序文库接头 T 扩展包 (EXP-RAP111)
- RNA 参照品扩展包 (EXP-RCS001)
测序芯片
测序设备
- MinION Mk1B
- MinION Mk1C
- GridION
- PromethION
