Information
我们推荐有以下需求的用户使用该试剂盒：
- 希望在不借助 PCR 的情况下，靶向测序序列长度在5-20 kb的特定区域，并获得较高覆盖度（>100x）。
- 希望借助多个靶向位点（不超过100个），通过单次测序即获得长且连续的感兴趣区域（ROI）的序列信息*
- 备有1-10 µg 高质量基因组DNA
- 希望探究甲基化模式或其它修饰碱基。
- 目标基因具有高度重复性，或希望评估序列重复次数，但希望避免因使用传统扩增方法或合成测序法而带来的潜在偏倚。
- 希望在单次测序中，为不适合长距离PCR扩增的目标长基因测序（>30 kb）。
* 请注意： 此种针对感兴趣区域的文库制备方式称为“叠瓦式”。
请注意：使用本试剂盒，您需要购买额外的第三方试剂：详情请见“第三方材料”板块。
请注意：Cas9测序试剂盒仅兼容R9.4.1测序芯片（FLO-MIN106D 或 FLO-MINSP6）。
Cas9测序试剂盒的特点：
更多信息：
SQK-CS9109 试剂盒操作简便价格经济，且依托Cas9 靶向测序快速灵活的优势，无需扩增即可针对感兴趣区域进行测序。
当感兴趣区域长度在5-20kb之间时，使用CRISPR/Cas 系统在区域两端各切割两次所得覆盖度最高。如仅具备感兴趣区域一端的序列信息，您可考虑单次切割已知序列端，而后测序。
如您希望对长度超过20kb的区域进行靶向测序，我们建议您采用叠瓦式方法测序或/并确保起始DNA材料尽可能完整。如不具备完整的起始 gDNA，则测序区域跨度无法加长。
我们强烈建议您在实验初期使用多个探针并建立与实验材料及目标相匹配的实验方法。您可在 使用CRISPR/Cas 系统进行靶向、免扩增 DNA 测序 一文中查阅更详细的建议。
许可：
Oxford - Broad
Oxford - Caribou
运输和物流：
测序芯片和试剂盒均置于环保且控温的装运箱中一起运输。
大陆地区工作日均可发货，根据运输情况1-3天到达。港澳台地区每周一从英国发货。
Workflow
Cas9测序试剂盒提供了一种从基因组DNA样本中富集感兴趣区域（ROI）的方法。样本DNA经过纯化后，5’端去磷酸化以降低测序接头与非目标序列非特异性连接的可能。接着向基因组DNA中加入结合有CrRNA及tracrRNA的Cas9核糖核蛋白复合物（RNPs）。RNPs结合双链DNA上的感兴趣区域（ROI），并由Cas9进行切割，切口为平末端。然后为样本中所有DNA的3’端添加dA尾，以便平末端与测序接头相连。测序接头主要连接经Cas9切割且3’端带dA尾并5’端被磷酸化的DNA片段。使用AMPure XP磁珠纯化上述样本以去除多余接头，再使用测序缓冲液重悬（此步骤无法去除非目标分子）。将所得文库上样至芯片测序。
